Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型乳癌患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失家兔自身抗锥体到消失1M-癌症诊断病征的的发展率在儿童时期就有很好的描绘，多个家兔自身抗锥体HIV的儿童之前有70%在血清转化后10年内患上癌症，而随访15年的儿童这一数目上升到84%。比起，占到诊断1M-癌症一半以上的M-1M-癌症的发病程序还没有取得更进一步的研究课题。

越来越多的人开始用到分期系统来定义1M-癌症的的发展：个锥体在消失多种家兔自身抗锥体时转至第1之前，消失血糖异常时转至第2之前，消失病征时转至第3之前。一些多发家兔自身抗锥体HIV的个锥体，在1期和2期，的发展较快，并发展为发病的1M-癌症。我们之前描绘了一小组在首次检查到多种家兔自身抗锥体结果表明后大概10年无癌症的极快的发展者，这小组病人人数少，但特征非常确切。随后，我们注意到家兔自身抗原特异性CD8+T该线粒体中间体在的发展较快的病人之前基本不存有，但在近期发病和肇因的癌症病人之前很容易检查到。这可能表明，与的发展病人相对来说，这些病人自身免疫中间体的可调强化。

早期研究课题表明，尽管可调性T该线粒体(Treg)数量正常，但癌症病人存有一些程序缺陷，其之前包括对IL-2的中间体意志力降低。此外，癌症病人之前的震荡CD4+T该线粒体可能对可调更具抵抗性，表现为震荡T该线粒体的抑止消散，纯净归因于的Treg和锥体外归因于的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T该线粒体之前IL-2中间体消散。本研究课题的目的是描绘了CD4+可调性T该线粒体(Treg)在一个大极较快的发展者之前的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群依此的纵向研究课题，在21岁以下确诊的病人亲属之前检查1M-癌症的生命危险因素。我们之前描绘了长时间较快的发展者的特征，他们保持多重家兔自身抗锥体HIV超过10年，但没有消失癌症的诊断病征，快性或非完成性自身免疫。随后，10名继续保持无癌症并愿意提供大量肝脏结果表明的较快的发展者纳入T和B该线粒体程序分析。在目前的研究课题之前，8名快的发展者(SP小组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的家兔自身抗锥体HIV。所有的组织者都处于1M-癌症的发展的1期，尽管一些人随后失掉了家兔自身抗锥体对某些抗原的HIV中间体，然而，一名病人已经处于2期大概6年，但没有消失诊断病征，一名病人被诊断为癌症，该受试者72岁，在热带植物实验结果表明时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之前对该供锥体完成了单独评核。分离外周血单个核该线粒体(PBMCs)，采用多模板流式该线粒体绝技和T该线粒体抑止试验车评核供锥体之前Treg的频带、表M-和程序。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、相关联和回归)完成无指导聚类分析，评核Treg表M-。

结果：与身心健康供锥体相对来说，来自快的发展锥体的心灵CD4+T该线粒体的指导聚类表明，酪氨酸的心灵CD4+ Treg频带上升，与糖皮质激素诱导的TNFR特别蛋白(GITR)解读上升有关。一名HbA1c升高的病人与的发展较快者和也就是说的印证小组相对来说，Treg磬有所并不相同。程序分析表明，与身心健康供锥体相对来说，来自较快的发展锥体的Treg介导的CD4+震荡T该线粒体抑止微小受到影响。表现为对震荡CD4+T该线粒体CD25和CD134解读的抑止上升。

绘成1 深入的表M-分析表明，CD4+Treg亚M-在快的发展队列之前上升。由FlowSOM转化成的Treg室，周围在来自所有供锥体的已逝CD4+CD45RA -该线粒体上。根据标明物解读鉴定成10个元簇:心灵T该线粒体_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T该线粒体;HLA-DR + GITR +心灵T该线粒体;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用到9个并不相同Treg标明转化成的10个元簇的MST。每个数据流都是一个战斗群(100个战斗群)，很大的元战斗群(10个元战斗群)在数据流小组周围上色。每个数据流之前的饼绘成坚称单个标明的解读等级。(b)每个元聚类的热绘成，以表明整锥体标明解读。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转化成绘成，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说重元素为每个metacluster盒该线绘成(重元素> 0.05%)确定为HD和SP小组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T该线粒体(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T该线粒体(l)。粉红色圆点都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于绘成形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘成2 用到CITRUS的预测模M-推测，Treg频带的上升是的发展较快的标志。级别旁路(a - f)和柑橘分析(g-k)较为SP组织者和也就是说的HD组织者在CD4+CD45RA−T该线粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的都是性绘成。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读完成分离，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(布氏)小组以及供锥体SP 606(粉红色)之前CD25+ cd127的频带汇总绘成。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路偏序的盒该线绘成;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读其之前心渐变，交叉突成的簇被识别为SP和HD队列密切关系的并不相同。(j)盒该线绘成表明了在SP(布氏)和HD(灰点)小组之前，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的一般来说重元素(数目)。(k)灰度表明每个簇的表M-(深蓝色)和Treg标明一般来说解读与背景解读(深蓝色);上列，缓存Treg_3;示意图恰巧，缓存Treg_4。背景与所有其他簇之前标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

绘成3 与身心健康献血者相对来说，的发展较快者心灵treg的GITR上升。每个心灵CD4+T该线粒体元簇(心灵T该线粒体_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T该线粒体;HLA-DR + GITR +心灵T该线粒体;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个解读标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热绘成(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR解读串联，表明灰度(c)和汇总绘成(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有供锥体包括，p< 0.05(深蓝色)供锥体SP 606和也就是说的HD不包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR解读，从级别旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(粉红色)串联，表明灰度(e)和汇总绘成(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

绘成4 来自较快的发展的CD4+ treg该线粒体控制震荡CD4+T该线粒体的意志力降低。SP小组用深蓝色的该线和圆点坚称，HD小组用银色的该线和圆点坚称，粉红色的该线/圆点坚称供锥体sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T该线粒体完成分选。CD4+CD25−(；也者)被标明为CFSE, Treg按注意到的数目滴定。用抗CD3 /28微珠增殖该线粒体，培养出来3天后完成流式该线粒体绝技检查。(a-d)与CD4+；也者一般来说应的treg培养出来(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。用到HIV印证(酪氨酸的响应该线粒体不含treg)计算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

绘成5 震荡CD4+T该线粒体对较快的发展的T该线粒体增殖的抑止更敏感性。SP小组用深蓝色的该线和圆点坚称，HD小组用银色的该线和圆点坚称，粉红色的该线/圆点坚称供锥体sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T该线粒体完成分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标明，treg按注意到的数目滴定。用抗CD3 /28微珠增殖该线粒体，培养出来3天后完成流式该线粒体绝技(CD25反染)和介导分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者一同培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百份(b)。(c,d) CD25抑止百份(c)和CD134抑止百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来之前的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

论断：我们得成的论断是，来自较快的发展子的增殖心灵CD4+Treg在GITR解读之前取得了扩展和丰沛，强调了进一步研究课题Treg在1M-癌症高风险个锥体之前的系统性的必要性。

原文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28