Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展较快的过程中逐渐扩展

从第一次浮现肾脏自身HIV到浮现1M-白血病针灸患者的的拓展率在青少年一时期就有较好的描述，多个肾脏自身HIV无症状的青少年之中曾70%在血清反之亦然后10年中肺结核白血病，而随访15年的青少年这一分之一缩减到84%。相比较之下，分之一针灸1M-白血病一半以上的M-1M-白血病的复发机制还没得到充分的分析。

愈加多的人开始引入分期系统来定义1M-白血病的的拓展：生殖在浮现多种肾脏自身HIV时转入第1先决条件，浮现血糖精神状态时转入第2先决条件，浮现患者时转入第3先决条件。一些多发肾脏自身HIV无症状的生殖，在1期和2期，的拓展较很慢，并拓展为复发的1M-白血病。我们之前描述了都由成员在首次样品到多种肾脏自身HIV抽样后至少10年无白血病的以致于很慢的拓展者，这组成员患者人数少，但特征更为明确。随后，我们发现肾脏自身抗基底特异性CD8+T细胞膜化学反应在的拓展较快的患者之中基本不实际上，但在近期复发和长期以来实际上的白血病患者之中很难以样品到。这不太可能断定，与的拓展患者相比较，这些患者神经性化学反应的抑制强化。

早期分析断定，尽管抑制性T细胞膜(Treg)为数浮现精神状态，但白血病患者实际上一些机能弱点，其之中有数对IL-2的化学反应能够减缓。此外，白血病患者之中的振荡CD4+T细胞膜不太可能对抑制更具抵抗性，展示出为振荡T细胞膜的减缓移向，自然显现出的Treg和基底外显现出的正向Treg，以及抗基底经历的CD4+T细胞膜之中IL-2化学反应移向。本分析的目的是描述了CD4+抑制性T细胞膜(Treg)在一小群以致于较快的拓展者之中的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以人群为基础的交叉分析，在21岁表列复发的患者亲属之中安全检查1M-白血病的危险因素。我们之前描述了长期以来较快的拓展者的特征，他们维持多重肾脏自身HIV无症状超过10年，但没浮现白血病的针灸患者，很慢性或非完成性神经性。随后，10名继续维持无白血病并愿意提供大量血液抽样的较快的拓展者纳入T和B细胞膜机能归纳。在在此之前的分析之中，8名很慢的拓展者(SP组成员)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的肾脏自身HIV无症状。所有的参与者都所处1M-白血病的拓展的1期，尽管一些人随后耗尽了肾脏自身HIV对某些抗基底的无症状化学反应，然而，一名患者之前所处2期至少6年，但没浮现针灸患者，一名患者被诊断为白血病，该受试者72岁，在野外实验抽样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在建模之中对该ADP完成了除此以外效用评估。分离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，引入多给定流式细胞膜心法和T细胞膜减缓测试效用评估ADP之中Treg的频谱、表M-和机能。引入FlowSOM和CITRUS(聚类深入分析、表征和回归)完成无行政官员聚类归纳，效用评估Treg表M-。

结果：与身心健康ADP相比较，来自很慢的拓展基底的潜意识CD4+T细胞膜的行政官员聚类结果显示，激活命的潜意识CD4+ Treg频谱缩减，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白(GITR)暗示缩减有关。一名HbA1c增大的患者与的拓展较快者和反之亦然的样本成员相比较，Treg谱有所有所不同。机能归纳断定，与身心健康ADP相比较，来自较快的拓展基底的Treg酪氨酸的CD4+振荡T细胞膜减缓微小损坏。展示出为对振荡CD4+T细胞膜CD25和CD134暗示的减缓缩减。

所示1 透彻的表M-归纳结果显示，CD4+Treg亚M-在很慢的拓展链表之中缩减。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有ADP的活命CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标识物暗示深入分析出10个元簇:潜意识T细胞膜_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)引入9个有所不同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个键值都是一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在键值组成员周围上色。每个键值之中的饼所示坚称单个标识的暗示AO。(b)每个元聚类的热所示，以结果显示整基底标识暗示。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的基岩。(e-l)相对于同位素为每个metacluster箱内终点站所示(同位素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞膜(l)。紫色白点都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 引入CITRUS的预测模M-声称，Treg频谱的缩减是的拓展较快的字样。AO旁路(a - f)和葡萄归纳(g-k)比较SP参与者和反之亦然的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的都是性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR暗示完成分离，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(星点)组成员以及ADPSP 606(紫色)之中CD25+ cd127的频谱摘要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路三偏序的箱内终点站所示;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示低压上色，白点突出的簇被识别为SP和HD链表密切关系的有所不同。(j)箱内终点站所示结果显示了在SP(星点)和HD(灰点)组成员之中，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对于同位素(分之一)。(k)直方所示结果显示每个簇的表M-(粉色)和Treg标识相对于暗示与背景暗示(深蓝色);上列，缓存Treg_3;上头偷偷地，缓存Treg_4。背景与所有其他簇之中标识的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验

所示3 与身心健康献血者相比较，的拓展较快者潜意识treg的GITR缩减。每个潜意识CD4+T细胞膜元簇(潜意识T细胞膜_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个暗示标识的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的暗示热所示(sp606不有数在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇之中所有HD(黄褐色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR暗示结合，结果显示直方所示(c)和摘要所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和化验，p< 0.07(紫色)所有ADP有数，p< 0.05(深蓝色)ADPSP 606和反之亦然的HD不有数在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR暗示，从AO旁路，从所有HD(黄褐色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)结合，结果显示直方所示(e)和摘要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩化验

所示4 来自较快的拓展的CD4+ treg细胞膜掌控振荡CD4+T细胞膜的能够减缓。SP组成员用深蓝色的终点站和白点坚称，HD组成员用黑色的终点站和白点坚称，紫色的终点站/白点坚称ADPsp606。引入CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜完成分选。CD4+CD25−(应答者)被标识为CFSE, Treg按判读的分之一氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠活命化细胞膜，培育出3天后完成流式细胞膜心法样品。(a-d)与CD4+应答者相对于应的treg培育出(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培育出。(a,b,f) CFSE正向(a,e)和CFSE减缓总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓总和。引入无症状对照(激活命的响应细胞膜不含treg)计算减缓总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 振荡CD4+T细胞膜对较快的拓展的T细胞膜活命化的减缓更敏感。SP组成员用深蓝色的终点站和白点坚称，HD组成员用黑色的终点站和白点坚称，紫色的终点站/白点坚称ADPsp606。引入CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜完成分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标识，treg按判读的分之一氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠活命化细胞膜，培育出3天后完成流式细胞膜心法(CD25反染)和细胞膜因三子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培育出。(a,b) CFSE正向(a)和CFSE减缓百分率(b)。(c,d) CD25减缓百分率(c)和CD134减缓百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大之中的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们推断的结论是，来自较快的拓展三子的活命化潜意识CD4+Treg在GITR暗示之中得到了扩充和更为丰富，强调了更进一步分析Treg在1M-白血病效用生殖之中的异质性的重要性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28